方法步驟：
1） 尿素洗過夜的轉印紙再以10 mL PBST 洗三次，每次約10 min，均在上述方形培養皿中進行。
2） 轉印紙放在明膠NET 溶液中反應，置室溫中反應1 h。一般使用方形培養皿當容器，但亦可裝入塑料袋中反應，較節省試劑用量。
3） 反應后，以PBST 浸洗二次。
4） 把轉印紙放在抗體溶液中反應，置室溫反應1 h。
5） 反應后以PBST 洗三次，改用酶聯體反應，在室溫下反應1 h。
6） 以PBST 洗四至五次，注意容器也要洗干凈。
7） 加入DAB 基質溶液約10 mL 呈色，盡量避光，并且不時搖動呈色液。
8） 數分鐘內可呈色，在背景加深前倒去DAB，以水沖過數次后晾干。

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