再擴增SCFvVLCDR3基因文庫添加3’限制性位點

[方法]
1．配制4個50ul PCR反應混合液， 包含：
● 去離子水，35．5ul
● 20×dNTP（每種5mmol/L），2．5ul
● 10×Vent聚合酶緩沖液，5．0ul
● LMB3引物 （10pmol/ul）， 2．5ul
● VL—NotI引物 （10pmol/ul）， 2．5ul
● scFV基因模板DNA（100ng）， 1ul
● VentDNA聚合酶（2單位），1．0ul
2．在有加熱蓋的熱循環儀內，加熱反應混合液到94℃5分鐘。
3．以94℃1分鐘、42℃1分鐘、72℃2分鐘的條件共循環30次，擴增VL基因。
4．用Winard PCR純化試劑盒純化PCR產物。
5．用NcoI和NotI消化PCR產物。

m.5g11b.com