檢測大腸桿菌的分子生物學(xué)方法

傳統(tǒng)的細菌分離、培養(yǎng)及生化反應(yīng)，已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學(xué)的研究。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，特別是免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)及計算機技術(shù)的不斷發(fā)展，新的微生物診斷技術(shù)和方法已廣泛被應(yīng)用。近來國內(nèi)外學(xué)者不斷努力，已創(chuàng)建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的微生物診斷方法，尤其是DNA探針和以PCR為代表的分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及自動化儀器的應(yīng)用已明顯加快了微生物檢驗的速度，明顯提高了微生物的診斷水平。

近年文獻表明，核糖分型不能用來鑒定EHEC0157：H7血清型之間的菌株。脈沖場凝膠電泳（pulsed-fieldgelelectrophoresis，PFGE）和噬菌體分型是zui有價值的鑒定技術(shù)，PFGE作為一種DNA指紋圖被廣泛利用，且優(yōu)于其他DNA分析方法，它已成功地應(yīng)用于對部分菌落進行分類。

將檢查的VT基因型以PCR底物酶切后，經(jīng)PFGE分析其限制性片段長度的多態(tài)性。Bohn和Karch用此法證實了德國一次流行的26個菌株為相似的譜型。蘇格蘭的Krause用此法分析的124個菌株，可分為12個噬菌體型，其中2型和49型占所研究噬菌體型的63．7％。

據(jù)報道，現(xiàn)已確定66種噬菌體型，應(yīng)用噬菌體分型在美國分出24個型，流行株以1型、2型、4型、49型為主。加拿大暴發(fā)分離的13個菌株和美國內(nèi)布拉斯分離的3個菌株均為1型，美國北卡羅來那洲暴發(fā)分離的4個菌株為2型。因此，噬菌體分型對預(yù)測VT有一定的參考價值。不同的噬菌體產(chǎn)生VT的特點不同，既能產(chǎn)生VTl，又能產(chǎn)生VT2的有1型、8型、14型，而2型、49型只產(chǎn)生VT2。
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